谷氨酰胺合成酶(GS)活性檢測試劑盒

產(chǎn)品名稱: 谷氨酰胺合成酶(GS)活性檢測試劑盒

產(chǎn)品英文名: Glutamine Synthetase（GS）Assay Kit

產(chǎn)品貨號：BC0910            產(chǎn)地：北京市通州區(qū)馬駒橋聯(lián)東U谷8三樓

產(chǎn)品規(guī)格：50管/24樣         產(chǎn)品商標：solarbio
保存與運輸：4℃保存或-20℃保存；            參考價格：360
庫存狀態(tài)：現(xiàn)貨                          
關鍵字: ：  谷氨酰胺合成酶檢測試劑盒|GS檢測試劑盒|谷氨酰胺合成酶|試劑盒

簡要介紹：
GS（EC 6.3.1.2）主要存在于植物中，是生物體內(nèi)氨同化的關鍵酶之一，催化銨離子和谷氨酸合成谷氨酰胺，不僅可以防止過多的銨離子對生物有毒性，而且谷氨酰胺也是氨的主要儲存和運輸形式。
    GS 在ATP 和Mg2+存在下，催化銨離子和谷氨酸合成谷氨酰胺；谷氨酰胺進一步轉化為γ─谷氨酰基異羥肟酸，在酸性條件下與鐵形成紅色的絡合物；該絡合物在540nm 處有大吸收峰，可用分光光度計測定。

產(chǎn)品詳細描述
產(chǎn)品內(nèi)容：
提取液：液體30mL×1 瓶，4℃保存。
    試劑一：液體10mL×1 瓶，-20℃保存。
    試劑二：液體10mL×1 瓶，-20℃保存。
    試劑三： 粉劑×2 瓶，-20℃保存。用時每瓶加入5mL蒸餾水充分溶解備用，用不完的試劑仍-20℃保存。
    試劑四：液體15mL×1 瓶，4℃保存。

產(chǎn)品說明：
GS（EC 6.3.1.2）主要存在于植物中，是生物體內(nèi)氨同化的關鍵酶之一，催化銨離子和谷氨酸合成谷氨酰胺，不僅可以防止過多的銨離子對生物有毒性，而且谷氨酰胺也是氨的主要儲存和運輸形式。
    GS 在ATP 和Mg2+存在下，催化銨離子和谷氨酸合成谷氨酰胺；谷氨酰胺進一步轉化為γ─谷氨酰基異羥肟酸，在酸性條件下與鐵形成紅色的絡合物；該絡合物在540nm 處有大吸收峰，可用分光光度計測定。
實驗需自備的儀器和用品：
 可見分光光度計、水浴鍋、臺式離心機、可調(diào)式移液器、1 mL 玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
操作步驟：
一、樣品測定的準備 

1. 細菌、細胞或組織樣品的制備：

細菌或培養(yǎng)細胞：先收集細菌或細胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細菌或細胞數(shù)量（10⁴ 個）：提取液體積（mL）為500~1000：1 的比例（建議500 萬細菌或細胞加入1mL 提取液），超聲波破碎細菌或細胞（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10s，重復30 次）；8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。
組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10 的比例（建議稱取約0.1g 組織，加入1mL 提取液），進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。

1. 血清（漿）樣品：直接檢測。
2. 測定操作表
3. 分光光度計預熱30min 以上，調(diào)節(jié)波長540nm，蒸餾水調(diào)零。
4. 在EP 管中加入下列試劑：

混勻，靜置10min 后，5000g，常溫離心10min，取上清液測定540nm 處的吸光值A。△A=A測定管-A 對照管。每個測定管需設一個對照管。


三、計算
GS 活力單位的計算

1. 血清（漿）GS 活性

單位定義：每mL 血清（漿）在每mL 反應體系中每min 使540 下吸光值變化0.01 定義為一個酶活力單位。
計算公式：GS（U/mL）=ΔA×V 反總÷V 樣÷0.01÷T =19×ΔA

1. 組織、細菌或細胞GS 活性
2. 按樣本蛋白濃度計算：

單位的定義：每mg 組織蛋白在每mL 反應體系中每min 使540nm 下吸光值變化0.01 定義為一個酶活力單位。
GS（U/mg prot）＝ΔA×V 反總÷（Cpr×V 樣）÷0.01÷T =19×ΔA÷Cpr

1. 按樣本鮮重計算：

單位的定義：每g 組織在每mL 反應體系中每min 使540nm 下吸光值變化0.01 定義為一個酶活力單位。
GS（U/g 鮮重）＝ΔA×V 反總÷(W× V 樣÷V 樣總)÷0.01÷T =19×ΔA÷W

1. 按細菌或細胞密度計算

單位定義：每1 萬個細菌或細胞在每mL 反應體系中每min 使540nm 下吸光值變化0.01 定義為一個酶活力單位。
GS（U/10⁴ cell）＝ΔA×V 反總÷(500×V 樣÷V 樣總)÷0.01÷T =0.038×ΔA
V 反總：反應體系總體積，0.8mL； V 樣：加入樣本體積，0.14mL；V 樣總：加入提取液體積，1 mL；T：反應時間，30 min；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g；500：細菌或細胞總數(shù)，500 萬。

相關文獻：
《Possible roles of?glutamine synthetase in?responding to?environmental changes in?a?scleractinian coral》 作者:Yilu?Su,Zhi?Zhou,Xiaopeng?Yu 期刊:Molecular Biology Reports  影響因子:2.107 PMID:
《Knockout of SlSBPASE Suppresses Carbon Assimilation and Alters Nitrogen Metabolism in Tomato Plants》 作者:Fei Ding, Qiannan Hu, Meiling Wang and Shuoxin Zhang 期刊:International Journal of Molecular Sciences 影響因子:4.183 PMID:30558146
《Ammonium Nitrogen Tolerant Chlorella Strain Screening and Its Damaging Effects on Photosynthesis》 作者:Jie Wang, Wei Zhou,Hui Chen,Jiao Zhan, Chenliu He,and Qiang Wang 期刊:Frontier in Immunology 影響因子:4.259 PMID:30666245
《Modulating plant growth–metabolism coordination for sustainable agriculture》 作者:Shan Li, Yonghang Tian, Kun Wu, Yafeng Y, Jianping Yu, Jianqing Zhang, Qian Liu, Mengyun Hu, Hui Li, Yiping Tong,Nicholas P. Harberd4 & Xiangdong Fu 期刊:Nature 影響因子:43.07 PMID:30111841