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產品名稱:堿性磷酸酶染色液(偶氮偶聯法)

產品型號:G1480

產品報價:

產品特點:堿性磷酸酶染色液(偶氮偶聯法)
堿性磷酸酶(Alkaline phosphatase,簡稱 ALP 或 AKP)為一類磷酸酯酶,廣泛分布于哺乳動物組
織內,其活性所需適 pH 9.2~9.8。此酶主要存在于物質交換活躍之處(細胞膜)

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G1480堿性磷酸酶染色液(偶氮偶聯法)的詳細資料:

堿性磷酸酶染色液(偶氮偶聯法)

自備材料:
1、載玻片、濕盒
2、普通光學顯微鏡
產品簡介
       堿性磷酸酶(Alkaline phosphatase,簡稱 ALP 或 AKP)為一類磷酸酯酶,廣泛分布于哺乳動物組
織內,其活性所需適 pH 9.2~9.8。此酶主要存在于物質交換活躍之處(細胞膜),如腸上皮和腎近曲小管的刷狀緣、附睪上皮之靜纖毛、肝的毛細膽管膜以及微動脈和毛細血管動脈部之內皮,還見于內質網、高爾基復合體、吞飲小泡、腸上皮之溶酶體、中性粒細胞之中性顆粒以及平滑肌之細胞膜。不是采用金屬沉淀法來顯示堿性磷酸酶活性,而是采用偶氮偶聯法(又稱同時偶聯法),其原理是在 pH9.2~9.8 的堿性條件下,細胞內堿性磷酸酶可使 AB-BI 磷酸鹽水解,釋放出磷酸與萘酚,后者與偶聯重氮鹽生成有色產物,定位于細胞質中。該染液可用于血液、骨髓或細胞涂片、冰凍切片、梯度入水后的石蠟切片等的堿性磷酸酶染色,堿性磷酸酶活性部位呈藍色,位于胞槳,結果較金屬鹽沉淀法可靠。

操作步驟:
一、涂片或切片
1、 血液、骨髓或細胞涂片、冰凍切片、石蠟切片入ALP固定液固定3min(梯度入水后的石蠟切片無需固定),水洗。
2、 滴加配制好的 ALP 孵育液,放入濕盒中,避光孵育 15~20min,水洗。
3、 入核固紅染色液或甲基綠染色液復染 3~5min。
4、 水洗、鏡檢或甘油明膠封固后鏡檢。
二、貼壁培養細胞
1、 取6孔板或其他容器培養的細胞,棄液,PBS清洗干凈。
2、 加入ALP固定液固定3min或4%多聚甲醛固定10~15min,PBS清洗。
3、 滴加配制好的 ALP 孵育液,放入濕盒中,避光孵育 15~20min,PBS 清洗。
4、 入核固紅染色液或甲基綠染色液復染 3~5min。
5、 PBS 清洗、鏡檢。

染色結果:
ALP 活性部位 藍色
細胞核 紅色(核固紅)或綠色(甲基綠)
血液、骨髓涂片結果判斷:
一般以積分報告結果,根據 100 個中性粒細胞陽性顆粒進行 0-4 計分。
細胞分值 染色特點
0 無顆粒
1 稍有顆粒
2 中等程度顆粒
3 多數顆粒
4 充滿顆粒

注意事項:
1. 血液或骨髓細胞涂片或其他樣本均應新鮮,薄厚適宜,及時固定,否則會影響酶的活性。
2. 培養細胞染色操作過程中,清洗、染色等步驟都應輕微,以免損傷或丟失細胞。
3. ALP 孵育液易失效或降低陽性強度,即配即用,不宜久置。
4. 復染時,核固紅染色液或甲基綠染色液二者取其一。
5. 每次染色時,應有陽性對照片。

相關文獻:

《Hedgehog pathway inhibition causes primary follicle atresia and decreases female germline stem cell proliferation capacity or stemness》 作者:Yu Jiang, Dantian Zhu, Wenfeng Liu, Qiushi Qin, Zhi Fang and Zezheng Pan 期刊:Stem Cell Research & Therapy 影響因子:4.627 PMID:31277696

堿性磷酸酶染色液(偶氮偶聯法)

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